全身性基因敲除 Knockout-KO(Cas9-KO)
运用CRISPR/Cas9技术,在选定的目的基因拟敲除区域两侧设计sgRNA,引导Cas9进行切割,形成双链断口(DSB),然后通过非同源末端连接(NHEJ)的方式进行修复,造成目的基因大片段缺失,从而实现基因敲除。
优势:大片段敲除,敲除更彻底;最快35天内可获得Founder小鼠(F0)。
条件性基因敲除 Conditional Knockout(Cas9-CKO)
运用CRISPR/Cas9技术和自主研发的高效率同源重组基因编辑RGE技术(Robust Genome Editing system),把两个LoxP位点分别引入到拟敲除的外显子两侧。再与组织特异性表达 Cre 酶的工具鼠进行配繁,即可获得具有组织或细胞特异性敲除目的基因的小鼠。还可以与控制Cre表达的其他诱导系统相结合,对某一基因同时实现时空两方面的调控(Cre/ERT系统)。
常规/定点转基因 Transgene
将构建好的转基因片段通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内,注射的DNA片段随机整合到小鼠受精卵的基因组中,并稳定遗传给后代。再通过繁育建系获得稳定表达的转基因小鼠,称为常规转基因小鼠。
随着研究不断深入及技术的升级改进,目前已发现了如Rosa26,H11等“基因敲入安全港位点”,敲入这些位点的基因表达活性高,对旁侧基因影响较小,且是单拷贝、单位点定点整合,可实现外源基因的稳定高表达,即定点转基因。
基因敲入 Knock In(Cas9-KI)
运用CRISPR/Cas9技术和自主研发的高效率同源重组基因编辑RGE技术(Robust Genome Editing system),能把目的基因或者点突变等引入到小鼠基因组中的指定位置,可实现与内源基因的共表达或者原位替换。结合Cre/LoxP系统,还可实现目的基因的时空特异性敲入。